如何配制PBST缓冲液？
一、材料准备
试剂：磷酸二氢钾KH₂PO₄，分析纯、磷酸氢二钠Na₂HPO₄·12H₂O，分析纯、氯化钠NaCl，分析纯、氯化钾KCl，分析纯、Tween-20分析纯、去离子水。
仪器：电子天平精度0.001g、烧杯500mL/1000mL、玻璃棒、容量瓶1000mL、pH计、移液枪1mL、滤膜0.22μm、菌储液瓶。
二、配制步骤
1. 配制0.01M PBS母液
准确称量以下试剂：
- NaCl：8.0g
- KCl：0.2g
- Na₂HPO₄·12H₂O：3.58g
- KH₂PO₄：0.24g
将上述试剂依次加入500mL烧杯中，加入约800mL去离子水，用玻璃棒搅拌至全溶。
2. 定容与pH调节
将溶后的溶液转移至1000mL容量瓶中，用去离子水冲洗烧杯2-3次，洗液一并转入容量瓶，加去离子水至刻度线，混匀。使用pH计测溶液pH，用1M HCl或1M NaOH调节至pH 7.2-7.4。
3. 加入Tween-20
取上述PBS溶液1000mL，用1mL移液枪准确加入0.5mL Tween-20终浓度0.05%，磁力搅拌器搅拌5-10分钟至全混匀，即得PBST缓冲液。
4. 灭菌与保存
将PBST缓冲液通过0.22μm滤膜过滤除菌不可高温高压灭菌，避免Tween-20分，分装至菌储液瓶，4℃避光保存，有效期1个月。
关键要点：试剂称量需精确；pH需严格控制在7.2-7.4；Tween-20终浓度通常为0.05%可根据实验需求调整为0.05%-0.1%；过滤灭菌后4℃保存，避免反复冻融。
