从节目开播初期1997年到2000年代中期，主持人团队尚未全固定，李湘、何炅作为核心主持时，便常有“搭档互怼”式的PK设计。进入2006年“快乐家族”何炅、谢娜、李维嘉、杜海涛、吴昕正式成型后，主持人PK环节更加系统化，常以“分队对抗”或“个人挑战”的形式出现。
典型的PK场景多与游戏环节深度绑定。例如经典游戏“快乐传真”中，主持人会分成两队，通过肢体动作传递词语，传递错误率高的队伍需接受“惩罚”——可能是被喷泡沫、吃柠檬，或是即兴表演搞怪节目。谢娜与何炅的“相爱相杀”是这类PK的亮点：谢娜常因夸张动作笑场，何炅则凭借默契成为“常胜将军”，两人的互动既紧张又充满喜剧效果。 才艺比拼也是PK的重要形式。在“才艺大比拼”特辑中，主持人会各自展示绝活：何炅用流利的口才即兴主持小段节目，谢娜表演自编的幽默小品，李维嘉模仿当红明星的标志性动作，杜海涛和吴昕则挑战舞蹈或歌唱。这类PK不追求专业水准，更重“反差萌”——杜海涛的笨拙舞姿、吴昕的临场紧张，反而让观众捧腹，也拉近了主持人与观众的距离。 户外竞技环节中，主持人PK更具对抗性。早期节目曾设置“户外寻宝”“运动挑战赛”等单元，主持人分成两队成任务，如限时爬楼梯、趣味投篮等。李维嘉常因体力优势成为“力量担当”，杜海涛则凭借体重在“平衡游戏”中制造意外笑料，谢娜和吴昕的“女生组”虽常处于劣势，却总能靠机智化危机，让PK过程充满反转。随着节目发展，《快乐大本营》后期逐渐将重心转向嘉宾互动，主持人PK环节慢慢减少，但在许多观众的记忆里，那些年主持人之间的“互坑”与协作，早已成为节目“快乐基因”的重要组成部分——它不仅展现了主持团队的真实个性，更用轻松的对抗传递了“快乐至上”的内核，成为一代人心中不可磨灭的综艺记忆。