周星驰饰演包龙星是贯穿全片的核心人物，从游手好闲的候补九品知县，到历经磨难后为戚秦氏伸冤的正义官，他的厘头表演将荒诞与温情、搞笑与正义巧妙融合，“吵架楼”“舌战群儒”等名场面至今仍被反复模仿。
吴孟达饰演包有为作为包龙星的侄子，堪称“喜剧助攻担当”。他的夸张表情、肢体语言与周星驰形成绝佳默契，“喊冤被打”“伪装太监”等戏份笑点密集，与主角的互动既推动剧情，又强化了喜剧氛围，是影片不可替代的配角亮点。
张敏饰演戚秦氏是案件的关键受害者，她将弱女子被污蔑后的坚韧与绝望演绎得细腻动人，与包龙星在狱中相认的片段既催泪又温情，其温婉形象为影片增添了柔和底色。
徐锦江饰演常威作为反派核心，把恶霸的嚣张跋扈、心狠手辣刻画得入木三分，“常威打来福”“咆哮公堂”等名场面极具辨识度，反派形象的成功塑造让影片冲突更具张力。
除核心阵容外，吴启华饰演的方唐镜来福以刁钻刻薄的状师形象打破以往正派设定，钟丽缇饰演的莫再提活泼灵动，蔡少芬饰演的如烟美艳又带点泼辣，这些配角的精准演绎让《九品芝麻官》的故事层次更加丰富。
从市井小官到反派恶霸，从正义配角到痴情女子，演员们的生动诠释让影片不仅是一部喜剧，更藏着对人性与正义的探讨，这也是其历经多年仍被观众反复回味的关键。