实验记录：Trizol法提取组织中的RNA

实验目的

提取组织样本中的总RNA，为后续分子实验如RT-PCR、RNA测序提供高质量模板。

实验材料与仪器

材料：新鲜冻存组织样本-80℃保存、Trizol试剂批号：20230512、氯仿分析纯、异丙醇分析纯、75%乙醇DEPC水配制、DEPC水121℃高压灭菌20min。 仪器：低温高速离心机Eppendorf 5424R、组织匀浆器型号：IKA T10、超净工作台、移液器1mL、200μL、10μL、RNA酶离心管1.5mL、5mL、RNA酶Tip头。

实验步骤

1. 组织匀浆与裂

从-80℃冰箱取冻存组织约50mg，肝组织，编号T230615-01，置于预冷的RNA酶研钵中，加入1mL Trizol试剂，冰上快速研磨至可见组织块，转移至1.5mL离心管，室温静置5min裂核酸-蛋白复合物。

2. 氯仿抽提

向离心管中加入200μL氯仿，剧烈震荡15s，室温静置3min，4℃、12000×g离心15min。离心后溶液分层：下层有机相红色、蛋白层、上层水相色，含RNA，用200μL移液器小心吸取上层水相约400μL至新的RNA酶离心管。

3. 异丙醇沉淀RNA

向上层水相中加入等体积400μL异丙醇，轻轻颠倒混匀，室温静置10min，4℃、12000×g离心10min。离心后管底可见白色絮状沉淀RNA，弃上清，保留沉淀。

4. 乙醇洗涤

向沉淀中加入1mL 75%乙醇DEPC水配制，轻轻颠倒离心管洗涤沉淀，4℃、7500×g离心5min，弃上清；重复洗涤1次，再次离心后用移液器吸尽残留乙醇，室温开盖静置5min避免过度干燥导致RNA难溶。

5. RNA溶

向沉淀中加入50μL DEPC水，轻轻吹打至沉淀全溶，4℃保存备用。

实验记录要点

• 样本信息：肝组织，重量52mg，取材时间2023-06-15，冻存条件-80℃。
• 试剂使用：Trizol 1mL，氯仿200μL，异丙醇400μL，75%乙醇2mL。
• 仪器参数：离心温度4℃，氯仿抽提离心12000×g/15min，异丙醇沉淀12000×g/10min，乙醇洗涤7500×g/5min。
• 关键现象：裂后溶液均匀颗粒；离心分层清晰，上层水相体积约400μL；RNA沉淀呈白色絮状，溶后溶液色透明。 ：本记录仅呈现实验流程与关键数据，未包含RNA浓度与纯度检测结果。