Western blot实验中,制胶是蛋白质分离的关键步骤,其质量直接影响条带分辨率与实验重复性。制胶包括分离胶与浓缩胶的制备:首先根据目标蛋白分子量调整丙烯酰胺浓度(小分子用12-15%,大分子用8-10%),按比例配制新鲜试剂,注意APS需现配、TEMED避光。操作时依次混合试剂,快速混匀后注入玻璃板,避免产生气泡;分离胶需加水封隔绝氧气,聚合后倒去水封再灌注浓缩胶并插入梳子。整个过程需严格控制试剂比例、聚合时间,并避免气泡、漏液及聚合不完全,以确保凝胶质量满足后续电泳要求。制胶完成后应检查梳孔是否通...