干货分享：CCK-8细胞活性检测原理和实验步骤
一、检测原理
CCK-8检测基于
WST-82-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐与电子载体1-Methoxy PMS的协同作用。活细胞线粒体中的脱氢酶可将WST-8还原为橙黄色甲瓒产物Formazan，其生成量与细胞活性及数量成正比。通过酶标仪测定450nm处吸光度OD值，即可间接反映活细胞数量。该方法具有灵敏度高、操作便捷、放射性污染等优势，适用于细胞增殖、毒性及药物筛选实验。
二、实验步骤
1. 细胞接种
- 取对数生长期细胞，用胰酶消化后离心，调整细胞悬液浓度至1×10^4–1×10^5 cells/mL。
- 在96孔板中每孔加入100μL细胞悬液，设置3–5个复孔，同时设空白对照组仅培养基。
- 置于37℃、5% CO₂培养箱中孵育24小时，待细胞贴壁。
2. 药物处理按需选择
- 吸弃旧培养基，加入含不同浓度药物的新鲜培养基100μL/孔，对照组加入等量溶剂。
- 继续孵育根据实验需求设置时间，如24h、48h。
3. CCK-8试剂添加
- 每孔加入10μL CCK-8试剂，轻轻震荡混匀。
- 37℃培养箱中孵育1–4小时根据细胞活性调整时间，避免显色过饱和。
4. 吸光度测定
- 使用酶标仪在450nm波长处测定各孔OD值，参考波长可设为630nm。
- 计算细胞存活率：存活率(%) = [实验组OD值 - 空白组OD值/对照组OD值 - 空白组OD值] × 100%。
意事项：
- 避免气泡产生，检测前需确保甲瓒产物全溶。
- 若培养基含酚红，需以空白组OD值校正背景干扰。
- 试剂需避光保存，开封后尽快使用。
