- 分离胶试剂以10%胶为例，5ml体系：ddH₂O 1.9ml，30%丙烯酰胺溶液1.7ml，1.5M Tris-HClpH8.81.3ml，10% SDS 0.05ml，10% APS 0.05ml，TEMED 0.003ml。
- 浓缩胶试剂5%胶，3ml体系：ddH₂O 2.1ml，30%丙烯酰胺溶液0.5ml，1.0M Tris-HClpH6.80.38ml，10% SDS 0.03ml，10% APS 0.03ml，TEMED 0.003ml。
：丙烯酰胺浓度需根据目标蛋白分子量调整小分子选12-15%，大分子选8-10%，APS需新鲜配置，TEMED避光保存。
二、分离胶制备
1. 组装凝胶玻璃板：将干净的短板与短板对齐，夹入制胶架，确保底部漏液。
2. 按配方依次混合分离胶试剂除APS和TEMED外，涡旋混匀后加入APS和TEMED，快速颠倒混匀约5次。
3. 沿玻璃板内壁缓慢入混合液至距短板顶部2cm处，避免产生气泡。若有气泡，用tip轻轻搅动去除。
4. 随即在胶面上方缓慢入ddH₂O约0.5cm高，形成水封以隔绝氧气。室温静置30-40分钟，观察胶与水封界面是否清晰，胶面是否凝固轻触水封层，胶面不流动即可。
三、浓缩胶制备
1. 倒去分离胶上层水封，用吸水纸吸干残留水分，避免触碰胶面。
2. 按配方混合浓缩胶试剂除APS和TEMED外，涡旋后加入APS和TEMED，快速混匀。
3. 将混合液入分离胶上方，直至液面接近短板顶部预留梳子插入空间。
4. 斜向插入干净的10孔梳子，确保梳子齿底部气泡，轻轻按压使梳子与胶面贴合，避免倾斜。 室温静置20-30分钟，待浓缩胶全凝固轻拔梳子阻力，梳孔清晰。
四、制胶后检查
小心拔出梳子，用ddH₂O冲洗梳孔，去除残留胶屑。将凝胶玻璃板固定至电泳槽，加入1×电泳缓冲液确保液面没过梳孔，轻吹梳孔确认堵塞。
制胶过程需严格控制试剂比例与聚合时间，避免因气泡、漏液或聚合不全影响后续电泳效果。
Western Blot制胶实验记录中有何关键疑问？
Western blot实验记录：制胶操作与要点
Western blot实验中，制胶是蛋白质分离的基础步骤，其质量直接影响条带分辨率与实验重复性。以下为制胶操作的详细记录。
一、试剂准备
提前检查并配置所需试剂，确保沉淀、变质。